乙醇提取叶绿素a,使用多大浓度适宜?提取后测定含量时的吸收波长以及计算...
1、用90%乙醇即可。波长分别为750nm、663nm、645nm、630nm,国内方法公式和国外方法公式不同。国内参考公式为(164*(D663-D750)-16*(D645-D750)+0.10*(D630-D750))*V1/V*比色皿光程。
2、测定叶绿素a含量需要利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收多个波长下的吸光值,即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收,且两吸收曲线相交于652nm处。
3、用叶绿体色素提取色素并测定叶绿素的含量。利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性,可用 95%乙醇提取。 分离色素的方法有多种,如纸层析、柱层析等。纸层析是其中最简单的一种。
4、以95%乙醇为空白,在波长665nm、649nm下测定吸光度。实验结果计算:将测定得到的吸光值代入下面的式子:Ca=195A665-88A649;Cb=296A649-32A665。
5、根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素a、b含量用什么方法测定?
叶绿素a、b含量 分光光度法 叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm。
叶绿素含量d645的测定方法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。不过目前应用最为广泛的还是分光光度法。
利用分光光度法测定叶绿素含量是依据Lambert-Beer定律d645,数学表达式为A=Kbc。其中d645,A为吸光度;K为吸光系数;b为溶液的厚度;c为溶液浓度。叶绿素a,b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别在663nm和645nm处。
如果溶液中有多种吸光物质,则此混合液在某一波长下总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和,这就是吸光度的加和性。本实验测定提取液中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的。
叶绿素含量的测定及计算结果
利用分光光度法测定叶绿素含量是依据Lambert-Beer定律,数学表达式为A=Kbc。其中,A为吸光度;K为吸光系数;b为溶液的厚度;c为溶液浓度。叶绿素a,b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别在663nm和645nm处。
纸层析后,按照溶解性的顺序排列,最上面是胡萝卜素,再者是叶黄素,叶绿素a,叶绿素b.按照含量来排,最多的是叶绿素a,其次是叶绿素b,第三是叶黄素,胡萝卜素最少。
选出叶片叶绿素a、叶绿素b和SPAD值同时测定的最优波长,即选择预测相对标准误差最小的波长组合。
步骤: (1)将取自叶片的样品加入95%乙醇,研磨均匀; (2)离心沉淀后,用分光光度计分别在663nm和645nm两个波长下测定提取液的吸光度; (3)根据计算公式计算出叶绿素a和叶绿素b的含量。
叶绿素提取实验报告,有谁知道?紧急!
叶绿体中含有绿色素(包括叶绿素a和叶绿素b)和黄色素(包括胡萝卜素和叶黄素)两大类d645,这两类色素都不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。提取液可用色层分析d645的原理加以分离。
取新鲜d645的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。
把叶片放入盛有酒精d645的烧杯中,隔水加热,便可使绿叶素溶解到酒精中。
提取的叶绿体的色素,叶绿体的色素能够溶解在有机溶剂中。